Morfologie bakterií

Kvalitativní mikroskopické vyšetření

Mikroorganismy můžeme pozorovat:

a) v nativním preparátu (hodnocení morfologie kvasinek a plísní, průkaz střevních parazitů, atd.),

b) ve vlhké komůrce a ve visuté kapce (dlouhodobé pozorování mikroorganismů, hodnocení vývoje, růstu či pohybu),

c) ve fixovaném barevném preparátu (hodnocení morfologie bakterií, zjištění přítomnosti spor, pouzder a dalších buněčných struktur).

Nativní preparát ukazuje skutečný tvar buněk neovlivněný fixací a barvením, můžeme v něm pozorovat i pohyb bakterií. Odmaštěné podložní sklíčko protáhneme v plameni a umístíme na tmavou podložku. Do kapky sterilního fyziologického roztoku sterilní kličkou dobře rozmícháme malé množství mikrobiální kultury. K okraji kapky přiložíme krycí sklíčko a lehce je přitiskneme na suspenzi tak, abychom odstranili vzduchové bubliny. Přebytečnou tekutinu odsajeme filtračním papírem. Pro pozorování nativního preparátu je nejvhodnější mikroskopie s fázovým kontrastem.

Při přípravě fixovaného preparátu vetřeme kličkou do kapky sterilního fyziologického roztoku na odmaštěném podložním sklíčku malé množství bakteriální kultury a dokonale ji zhomogenizujeme. Kapku rozetřeme v tenké vrstvě po povrchu sklíčka a necháme zaschnout při laboratorní teplotě na bezprašném místě. Po úplném zaschnutí se preparáty fixují trojnásobným protažením podložního sklíčka v plameni nátěrem buněk vzhůru (dojde k denaturaci proteinů a devitalizaci mikroorganismů). Nevýhodou fixace za horka je narušení vnitřní struktury buněk. Proto se při přípravě preparátu k hodnocení vnitřních buněčných struktur doporučuje použití chemické fixace (např. ethanol, formaldehyd, kyselina octová).