Taxonomie prokaryot

Stránky: Moodle Veterinární univerzita Brno
Kurz: Mikrobiologie potravin a mikrobiologické laboratorní metody 1
Kniha: Taxonomie prokaryot
Vytiskl(a): Nepřihlášený host
Datum: pondělí, 13. května 2024, 21.45

Popis

Kapitola popisuje základní pravidla taxonomie prokaryot.

Taxonomie - úvod

Taxonomie je věda zabývající se charakterizací a zařazením organismů do jednotlivých taxonomických jednotek (tzv. taxonů), a to na základě jejich vlastností a vzájemného příbuzenského vztahu. V případě taxonomie prokaryot jsou oblastní studia organismy z domén Archaea a Bacteria.

Taxonomie se skládá ze tří vzájemně propojených oblastí:

  • klasifikace (uspořádání organismů do skupin na základě jejich podobnosti a příbuznosti),
  • nomenklatury (přiřazování jmen taxonomickým skupinám podle mezinárodních pravidel),
  • identifikace (zařazování nových izolátů do již ustavených a pojmenovaných taxonů).
Taxonomie má 2 hlavní funkce:
  1. identifikovat a popisovat základní taxonomické jednotky (druhy),
  2. a navrhovat vhodný způsob zařazování a katalogizace těchto jednotek.

Taxonomie je tedy dynamický subjekt, který se neustále mění na základě dostupných údajů.

Pro stanovení fylogenetického postavení prokaryot je klíčová sekvenční analýza 16S rDNA, kdy podobnost 97 % a vyšší je udávána jako hraniční pro zástupce stejného druhu. Jinými slovy tedy neidentifikovaný izolát, jehož kompletní sekvence genu pro 16S rRNA má podobnost <97% k nejbližším fylogenetickým sousedům, tvoří nový taxon.

Taxonomická hierarchie prokaryot

Nejvyšší postavení v taxonomii prokaryot má doména, následují nižší podskupiny – kmen, třída, řád, čeleď, rod, druh a podruh.

Na rozdíl od taxonomie eukaryot se nepoužívají termíny říše a oddělení.

Obecně vžité pojmy jako spirochéty, methan oxidující bakterie, atd. nemají oficiální postavení.

Druh

Základní taxonomickou jednotkou je druh (species, zkratka sp. nebo spp.).

Jako druh se obvykle označuje skupina individuí vykazují vysoký stupeň podobnosti, která se současně významně liší od jiné skupiny individuí. V bakteriologii je však druh definován jinak než v botanice či zoologii.

Prokaryota nejsou schopna pohlavního rozmnožování a jejich fenotypové a genotypové vlastnosti mohu být velmi proměnlivé, proto je zde vymezení druhu velmi obtížné.

Druh u prokaryot je tedy definován jako:
  • jasně vymezená skupina navzájem příbuzných kmenů, zahrnujících typový kmen
  • sdílející 70% a vyšší DNA-DNA homologii komplementárních párů bází
  • vykazující, až na výjimky, shodné fenotypové znaky
  • a současně mající některé odlišné znaky od jiných skupin.
Pro bakterie je charakteristická „genetická promiskuita“, tj. poměrně vysoká frekvence horizontální výměny části genetického materiálu mezi dvěma třeba i značně nepodobnými jedinci (konjugace, transdukce a transformace). Dalším faktorem je velká proměnlivost genetických vlastností bakterií vyplývající z haploidie jejich genomu. U haploidní buňky se každá mutace projeví, protože není zakryta normální funkcí druhé nemutované alely.

Nižší taxonomické jednotky - poddruh

Nižší taxonomické jednotky pod úrovní druhu představují poddruhy (lat. subspecies, zkratka subsp. nebo ssp.), které se od dalších poddruhů liší určitou fenotypovou (např. fyziologickou nebo biochemickou) vlastností, přičemž zůstává zachována vysoká DNA homologie v rámci daného druhu.

Poddruh má v nomenklatuře prokaryot oficiální postavení a je fylogeneticky validní.

Příkladem může být druh Salmonella enterica, který se dělí do šesti poddruhů.

Nižší jednotky s oficiálním postavením v taxonomii - příklad:

Druh (Species) Salmonella enterica
Poddruh (Subspecies) Salmonella enterica subsp. enterica

Nižší taxonomické jednotky - varieta

V mikrobiologické praxi se velmi často používá další typ vnitrodruhového třídění, tzv. variety. Jednotlivé variety jsou založeny pouze na vybraných „užitečných“ znacích, avšak neprokazatelných pomocí příbuznosti DNA. Variety jsou tedy skupiny kmenů daného druhu, které se rozlišují na základě speciálních charakteristik.

Variety, narozdíl od poddruhů, nemají v taxonomii oficiální postavení a jsou užitečné pouze z praktického hlediska.

Názvy variet obsahují příponu –var nebo –typ (používanější, ale méně správné označení). Třídění na úrovni variet má velký význam při epidemiologických analýzách.

Příklady variet:

  • sérovar – odlišení na základě antigenních vlastností (rod Salmonella, L. monocytogenes);
  • biovar – odlišení na základě biochemické či fyziologické vlastnosti;
  • fagovar – odlišení na základě schopnosti kmenů být lyzovány různými bakteriofágy (rod Salmonella, Listeria monocytogenes);
  • patovar – odlišení na základě patogenních vlastností pro různé hostitele.

Nižší jednotky bez oficiální postavení v taxonomii - příklad:

Serovar(typ)           Enteritidis
Biovar(typ)             např. A, B, C, D …
Fagovar(typ)           např. PT8
PFGE typ              např. 1, 2, 3 …
Rezistotyp             např. R-Amp

Vyšší taxonomické jednotky

Nejbližší vyšší taxonomickou jednotkou druhu je rod (lat. genus). Rod je obvykle dobře definovaná skupina taxonů (druhů, příp. i poddruhů), která je jasně odlišitelná od jiných rodů. Druhy a rody jsou v mikrobiologické praxi nejpoužívanější taxonomické jednotky.

Vyšší taxonomické jednotky - příklad:

hierarchie

Klasifikace

Cílem klasifikace je uspořádání organismů na základě jejich vzájemných vztahů a podobností do jednotlivých taxonů.

Prvním krokem klasifikace je experimentální stanovení vlastností mikroorganismu. Na základě výsledků analýzy jsou potom mikroorganismy zařazovány do jednotlivých skupin. Abychom tedy mohli mikroorganismy klasifikovat, musíme nejdříve znát jejich významné morfologické, biochemické, fyziologické, chemické, molekulárně-biologické a genetické charakteristiky.

Běžně používanou klasifikační metodou je numerická taxonomie, která díky využití počítačové analýzy umožňuje zpracování velkého množství dat z různých zdrojů (morfologické, biochemické, fyziologické, antigenní, atd.). Prvním krokem je shromažďování údajů pro klasifikované kmeny, jednotlivé charakteristiky jsou následně zakódovány a je vypočítána podobnost mezi kmeny. Zjištěná podobnost je závěrem analyzována za účelem vytvoření taxonomických struktur.

Klasifikace prokaryot je kategorie vytvořená pro mikrobiology a ne pro jednotky, které jsou klasifikovány.

Klasifikační znaky mikroorganismů

Znaky (vlastnosti) sloužící ke klasifikaci bakterií:

  • morfologické (tvar a velikost buněk, přítomnost bičíků, barvitelnost, vzhled kolonií, atd.)
  • fyziologické (schopnost využívat různé zdroje živin a energie, vztah ke kyslíku, složení a funkce buněčné stěny, tvorba nebo štěpení různých sloučenin, schopnost vyvolat onemocnění jistého hostitele či schopnost existence v různých typech prostředí, atd.)
  • sérologické a chemické (antigenní struktura, chemické složení buněčné stěny či buněčných struktur – peptidoglykan, kyselina teichoová, polární lipidy cytoplasmatické membrány, mastné kyseliny, atd.)
  • molekulární (složení bazí nukleových kyselin, tj. poměr cytosinu a guaninu k adeninu a thyminu vyjadřovaný v procentech jako obsah C+G, primární struktura DNA, atd.) 
  • genetické (schopnost výměny genů transformací, transdukcí nebo konjugací)

Existuje oficiální klasifikace bakterií?

Na rozdíl od nomenklatury, která je přesně stanovena neexistuje zatím žádná oficiální klasifikace bakterií. Jako „oficiální“ by mohla být navržena ta, která je široce akceptovatelná celou odbornou mikrobiologickou veřejností po nějakou dobu.

Poměrně velká část mikrobiologů používá jako „klasifikační příručku“ Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. Jedná se o několikasvazkovou publikaci, poprvé vydanou v roce 1923, která je neustále aktualizována.

Každý svazek má jiný kolektiv autorů a každý rod zpracovává přední světový odborník pro uvedený rod. Manuál popisuje všechny známé bakterie a uvádí tabulky vlastností jednotlivých druhů potřebné pro jejich identifikaci.

Bakterie jsou zde do jisté míry uspořádány z taxonomického hlediska, toto rozdělení však není úplné a řada bakteriálních rodů je zařazena za nejpříbuznějšími čeleděmi.

Bergeyho manuál se dělí na jednotlivé kapitoly neboli sekce, z nichž každá zahrnuje určitou skupinu bakterií vymezenou na základě fenotypových charakteristik – barvitelnosti podle Grama, morfologie, tvorby spor, atd. Jednotlivé sekce (celkem 33) potom tvoří např. grampozitivní koky, fakultativně anaerobní gramnegativní tyčinky, spirochety, atd.

Nomenklatura

Nomenklatura – tj. pojmenovávání jednotlivých taxonů.

Nomenklatura se řídí mezinárodně dohodnutými pravidly (mezinárodní nomenklatorický kód), je oficiální a jediná – každý taxon má jen jedno platné jméno.

Snahou je usilovat o stabilitu jmen organismů, vyhnout se použití jmen, které mohou způsobit chyby či zmatek v pojmenování a zabránit vytváření neužitečných jmen.

Mezinárodní nomenklatorický kód je odlišný pro živočichy, rostliny, bakterie a viry.

Nomenklatura prokaryot je založena na binomickém principu, který zavedl Linné a je nezávislá na botanické (s výjimkou názvů řas a hub) a zoologické (s výjimkou praprvoků a prvoků) nomenklatuře.

Nově popsaný taxon musí být publikovaný v periodiku International Journal of Systematic Bacteriology (od roku 2002 International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology) a musí být určena typová kultura.

Typová kultura je čistá, nezkontaminovaná kultura nového druhu (tzv. typový kmen). Před publikací jména nového druhu musí být kultura typového kmene deponována nejméně ve dvou veřejných trvalých sbírkách kultur mikroorganismů, kde je následně snadno dostupná a slouží jako referenční kultura pro přímé srovnávání s novými izoláty (např. Česká sbírka mikroorganismů Brno).

Vědecké názvy

Nomenklatura může obsahovat dvě části:

  1. informační či neplatné jméno (např. bacil tuberkulózy),
  2. vědecké jméno (Mycobacterium tuberculosis).

Vědecká jména taxonů prokaryot regulovaná nomenklatorickým kódem mají společné dvě věci:

  • pocházejí z latiny nebo řečtiny, nebo jsou latinizována v té formě, aby byla snadno rozpoznatelná jako vědecké jméno;
  • umožňují definovat pozici v taxonomické hierarchii.
Binomický princip znamená, že druh se označuje dvěma slovy:
  • podstatným jménem rodu (lat. genus)
  • přídavným jménem druhu (lat. species)
Příklady:
Bacillus cereus
Listeria monocytogenes
Lactobacillus casei
Staphylococcus aureus

Vědecké názvy

psaném textu se vědecké názvy druhu píší vždy kurzívou a s velkým počátečním písmenem v označení rodu, např. Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Lactobacillus casei, Staphylococcus aureus.

Přídavné jméno druhu začíná vždy malým písmenem, a to i v případě zkrácení rodového jména, např. Escherichia coliE. coli, Salmonella entericaS. enterica.

Název poddruhu se píše opět kurzívou a malými písmeny, a to mimo zkratky pro poddruh (subsp.), která se píše běžným písmem (ne kurzívou) – Salmonella enterica subsp. enterica.

Pokud v textu označujeme pouze příslušný rod bakterií, píše se za rodové jméno zkratka pro rod (spp.), která se opět píše běžným písmem (ne kurzívou) – Streptococcus spp., Vibrio spp.

Všechny názvy vyšších taxonomických jednotek než rod se píší kurzívou s velkým počátečním písmenem – např. čeleď Enterobacteriaceae, řád Methanobacteriales.

Některé bakterie, např. salmonely, jsou běžně klasifikovány až na úroveň serovarů (zkratka sv.), které se píší běžným písmem (ne kurzívou) a s velkým počátečním písmenem – např. Salmonella enterica subsp. enterica sv. Enteritidis. Mezinárodně vžitou praxí je zkracování názvů salmonel pouze na název rodu a sérotypu – např. Salmonella Enteritidis, S. Typhi.

Vědecké názvy

Vědecké názvy bakterií jsou nesklonné a vyslovují se podle pravidel středověké latiny:

  • c před a, o, u, souhláskou a na konci slova se čte jako k (Leuconostoc dextranicum),
  • c před e, ae, oe, i a y se vyslovuje jako c (Bacillus cereus),
  • s před samohláskou uprostřed slova (uprostřed kmene slova) se čte jako z (Lactobacillus casei, Yersinia pestis), v ostatních případech se čte jako s (Saccharomyces),
  • ae a oe se čte jako é (Enterobacteriaceae),
  • ti, po němž následuje samohláska se čte jako ci (Serratia spp.),
  • di, ti, ni se čte jako dy, ty, ny (Salmonella Enteritidis, Chlamydia spp.),
  • ph se čte jako f (Staphylococcus aureus).

Informační (triviální) názvy

Triviálními (počeštěnými) názvy se obvykle označují rody a vyšší taxonomické jednotky. Tyto názvy se píší malými písmeny, běžným písmem (ne kurzívou) a mohou se skloňovat.

Mezi běžně používané patří např. salmonely, stafylokoky, streptokoky, listerie, bacily. Triviální názvy se nikdy nepoužívají s názvem druhu.

U názvů odvozených od vlastního jména osoby nebo místa se i v počeštěné formě ponechává vlastní jméno v původní podobě, ale vyslovuje se podle zvyklostí příslušného jazyka.

Příklady:

  • escherichie – „ešerichie“ jsou pojmenovány po objeviteli Escherichia coli rakouském lékaři Theodoru Escherichovi
  • shigely – „šigely“ po objeviteli Shigella dysenteriae japonském lékaři Kiyoshi Shigovi
  • yersinie – „jersinie“ po objeviteli původce dýmějového moru Yersinia pestis francouzsko-švýcarském lékaři Alexandre E. J. Yersinovi

Identifikace

Identifikace je praktickou aplikací klasifikace a nomenklatury, je to proces dokazování, že nový izolát patří k jednomu již ustanovenému a pojmenovanému taxonu.

Při identifikaci bakterií se využívají klasifikační charakteristiky, identifikační schémata však nejsou totožná s klasifikačními schématy, ale mohou si být podobná.

Identifikační schéma pro skupinu mikroorganismů lze konstruovat až po tom, kdy byla tato skupina klasifikována.

Obecně platí, že charakteristiky zvolené pro identifikační schéma by měly být snadno stanovitelné a dále, že tato schémata obsahují pouze několik nejvýhodnějších rozlišujících charakteristik (u klasifikace velký počet). Podmínky, při nichž byly jednotlivé charakteristiky testovány by měly být standardně popsány.

Pro klasifikaci má každá zjištěná charakteristika stejnou váhu. Naproti tomu pro identifikaci mohou být některé znaky zvýhodněny oproti ostatním, a to v závislosti na identifikované skupině (např. koaguláza x stafylokoky; oxidáza x enterobakterie).

Provedení identifikace

Identifikace mikroorganismů původně spočívala na biochemických testech založených na růstu bakterií, případně doplněné o stanovení antimikrobiální citlivosti. Ve vybraných případech byla doplňkově dělána aglutinace, komplement fixační nebo neutralizační reakce – obecně se jednalo o postupy pracné s výsledky dostupnými až za několik dnů.

Bakteriální identifikace je nyní z velké části prováděna pomocí miniaturizovaných komerčních souprav – mikrotestů, často polo či plně automatizovaných. Tyto systémy umožňují odečítání výsledků za 2 – 4 hodiny, nejpozději do 24 hodin, jsou rychlé, spolehlivé, standardní, cíleně orientované na klinicky významné taxony a levné. Při rutinní identifikaci se využívá řada imunodiagnostických metod (imunofluorescenční techniky, latexová aglutinace, atd.).

Dichotomický klíč se běžně používá při identifikaci rostlin a živočichů, diskriminace se děje na základě hodnoty jednoho klíčového znaku. Jsou vytvořeny i klíče pro bakterie. Jejich omezením je mnoho výjimek z pravidla o té které hodnotě toho kterého znaku.

Např. přítomnost či nepřítomnost určité enzymové aktivity: stav kdy 100 % kmenů bude +  nebo 100 % kmenů bude – je nepravděpodobný. Pravděpodobnější je, že např. 80 % kmenů bude + a 20 % -. Proto je nutný statistický a pravděpodobností přístup nejen k taxonomii, ale i k identifikaci bakterií – hovoříme o numerické identifikaci.

Základní podmínku pro provádění identifikace je práce s čistou kulturou. Je nutné si uvědomit, že nárůst izolovaných kolonií na misce nemusí znamenat čistou kulturu, zvlášť použijeme-li selektivní média, kde může být přítomna živá, avšak téměř nerostoucí kontaminace poblíž izolovaných kolonií. Při subkultivaci ji můžeme přenést spolu se zvolenou kolonií. Z tohoto důvodu jsou pro konečnou izolaci upřednostňována neselektivní média.