Imunomagnetická separace

Site: Moodle Veterinární univerzita Brno
Course: Mikrobiologie potravin a mikrobiologické laboratorní metody 1
Book: Imunomagnetická separace
Printed by: Guest user
Date: Saturday, 22 March 2025, 10:45 PM

Description

Kapitola popisuje provedení imunomagnetické separace.

Imunomagnetická separace

Imunomagnetická separace (IMS) je založena na principu vazby cílových mikrobiálních buněk na specifické protilátky, které jsou imobilizovány na magnetických částicích (obvykle o velikosti několik mikrometrů). Vzniklý komplex je možné separovat ze suspenze pomocí vnějšího magnetického pole. Tato specifická separační technika umožňuje významné selektivní zakoncentrování cílových buněk.

                    IMS dynabeats                    IMS 2

(zdroj: https://www.idexx.com/water/products/invitrogen.html)

Provedení metody

Před vlastní IMS se provádí pomnožení vyšetřovaného vzorku potraviny ve vhodném, obvykle selektivním, živném médiu.

Pomnožený vzorek je smíchán v mikrozkumavce s imunomagnetickými částicemi, následuje 10 – 30 minutová inkubace při laboratorní teplotě, při níž se cílové bakterie váží na specifické protilátky magnetických částic.

Po magnetické separaci a opakovaném promytí mohou být navázané bakteriální buňky identifikovány kultivačně nebo dalšími mikrobiologickými technikami (ELISA, polymerázová řetězová reakce, atd.).

Přesný postup provedení je uveden ve skriptech Mikrobiologie potravin - praktická cvičení I. Obecná mikrobiologie. Revidované vydání, kapitola 13.4.3.

IMS 3

Hlavní kroky imunomagnetické separace

Využití metody v praxi

Imunomagnetická separace je široce využívána v klinické, potravinářské, veterinární i environmentální mikrobiologii. Umožňuje separaci a následnou detekci i subletálně poškozených mikrobiálních buněk.

Standardně je IMS součástí stanovení E. coli O157 v potravinách, kde umožňuje významné zkrácení doby vyšetření (nahrazuje krok selektivního pomnožení vzorku).

Dostupné jsou také imunomagnetické částice (tzv. Dynabeads®, výrobce Invitrogen, dříve Dynal) pro detekci dalších enteropatogenních nebo Shigatoxigenních kmenů E. coli (E. coli O26, O55, O104, O111, O145 a O172), salmonel či listerií v potravinách.

Provedení metody - video