Imunochromatografická metoda
| Stránky: | Moodle Veterinární univerzita Brno |
| Kurz: | Mikrobiologie potravin a mikrobiologické laboratorní metody 1 |
| Kniha: | Imunochromatografická metoda |
| Vytiskl(a): | Nepřihlášený host |
| Datum: | pondělí, 25. listopadu 2024, 18.55 |
Popis
Kapitola popisuje imunochromataografické metody využitelné při stanovení mikroorganismů v potravinách.
Imunochromatografická metoda
Imunochromatografické metody (označované též jako LFIA, Lateral Flow Immuno Assay) jsou velmi jednoduché a rychlé testy rutinně využívané v klinické i potravinářské mikrobiologii.
Nejběžnějším formátem je plošná imunochromatografie. Typicky se test skládá z porózní nitrocelulózové membrány, na které jsou imobilizovány vazebné proteiny (obvykle specifické protilátky) pro cílovou detekovanou molekulu. Membrána je uzavřena v plastovém pouzdře s otvory.
Provedení testu
Pomnožený vzorek se napipetuje určeným oknem do testu. V místě aplikace vzorku je v testu připraven konjugát (specifické protilátky proti cílovému antigenu navázané např. na částice zlata nebo barevné latexové částice). Dojde ke specifické reakci mezi konjugátem a cílovými antigeny.
Vytvořený komplex antigen-konjugát projde až na membránu a putuje dopředu směrem k linii vazebných proteinů (tzv. testovací linie). Vazebné proteiny (obvykle specifické protilátky proti cílovému antigenu) migrující komplex zachytí a imobilizují. V testovacím okně dojde v místě vazebné linie k vytvoření zřetelného pruhu či linky, což indikuje pozitivní výsledek.
Nadbytečný konjugát vzlíná dál membránou a je zachycen na dalším místě membrány, tzv. kontrolní linii, kde jsou navázány specifické protilátky proti konjugátu. Hromaděním zachyceného konjugátu opět vyvolá vznik barevného proužku. Tato linie slouží ke kontrole funkčnosti testu. Pokud nedojde k jejímu zvýraznění, je test neplatný.
Schéma imunochromatografického testu
(upraveno podle: MCMEEKIN, T.A. (ed.) Detecting pathogens in food. 1st ed. Cambridge, UK: Woodhead Publishing Limited. 2003. 384 p.)
Vyhodnocení a využití v praxi
Vyhodnocení
- pozitivní výsledek značí zřetelný barevný pruh v místě vazebné i kontrolní linie (2 proužky)
- v případě negativního výsledku je pruh vytvořen pouze v místě kontrolní linie (1 proužek)
Doba trvání testu je obvykle 15 – 20 minut. Podobně jako u dalších imunochemických technik, je nezbytné potvrdit pozitivní výsledky konvenční metodou.
Využití v praxi
- detekce Salmonella spp., Escherichia. coli O157 a Shigatoxinů ST1 a ST2, Listeria monocytogenes či Campylobacter spp., a to v různých potravinách či environmentálních vzorcích