Průkaz volné a vázané koagulasy

Úvod

Staphylococcus aureus je ubikvitární mikroorganismus schopný vyvolat různá onemocnění člověka. Jeho virulence je dána schopností produkovat velké množství biologicky aktivních látek, které lze rozdělit do tří skupin: a) adhezivní faktory, b) propagační a transportní faktory a c) ochranné faktory a toxiny.

Do skupiny adhezivních faktorů patří plazmakoagulasa (volná koagulasa), clumping faktor (shlukovací faktor, vázaná koagulasa) a několik produktů polysacharidové povahy.

Průkaz přítomnosti vázané koagulasy - princip

Vázaná koagulasa (angl. clumping factor) je povrchový protein schopný vázat fibrinogen a měnit jej na fibrin, čímž dochází k typickému shlukování buněk stafylokoků.

Její přítomnost je typická především pro druh Staphylococcus aureus.

Princip stanovení spočívá v reakci s fibrinogenem králičí plazmy, která se projeví shlukováním buněk (aglutinace).

Vizuálně dochází k vyjasnění původně mléčné suspenze a k tvorbě viditelných shluků.

Průkaz přítomnosti vázané koagulasy - postup provedení

Postup:

• Na čisté podložní sklo naneseme několik kapek sterilního fyziologického roztoku.
• Sterilní bakteriologickou kličkou nabereme testovanou kulturu a rozetřeme ji ve fyziologickém roztoku tak, aby vznikla mléčně zakalená suspenze.
• K suspenzi přidáme kapku králičí plazmy a kličkou směs dobře promícháme.
• Současně provedeme negativní kontrolu, kdy místo králičí plazmy smícháme bakteriální suspenzi s fyziologickým roztokem.
• K testování použijeme 24-hodinovou kulturu Enterococcus faecalis a Staphylococcus aureus.

Vyhodnocení: proti černému pozadí pozorujeme, zda do 2 minut dochází k projasnění suspenze a ke vzniku viditelných shluků.

Průkaz přítomnosti volné koagulasy

Volná koagulasa je extracelulární enzym schopný reagovat s plazmatickým faktorem za vzniku tzv. stafylotrombinu, který katalyzuje přeměnu fibrinogenu na fibrin.

Princip stanovení volné koagulasy spočívá v reakci s fibrinogenem králičí plazmy, která se projeví tvorbou chuchvalců, sraženin či úplným ztuhnutím plazmy ve zkumavce.

Výsledek testu odečítáme po 1, 3 a 24 hodinách. V případě pozitivní reakce dojde ke ztuhnutí plazmy nebo k vytvoření chuchvalců či sraženin. Intenzitu pozitivní reakce hodnotíme semikvantitativně na 1+, 2+, 3+ a 4+.

Přítomnost volné koagulasy je opět typická především pro druh Staphylococcus aureus.

Průkaz přítomnosti volné koagulasy - provedení