Sandwich ELISA - provedení testu

Prvním krokem každého ELISA testu je pomnožení vyšetřované potraviny, jejímž účelem je namnožení (zvýšení počtu) kontaminujících bakteriálních buněk.

Vazebné (imobilizované) protilátky jsou navázány na povrch pevného nosiče (např. jamky mikrotitrační destičky). Po přídavku pomnoženého vzorku dojde k vazbě cílových antigenů na protilátky. Následuje opakované promytí, kterým se odstraní zbytky vzorku.

Do jamek se přidá konjugát – detekční enzymaticky značené protilátky, které se váží na cílové antigeny. Několikanásobným promytím se odstraní nenavázané protilátky.

Po přídavku substrátu katalyzuje enzym jeho přeměnu na barevný produkt. Na závěr lze přidat tzv. stop roztok, který ukončí enzymovou aktivitu. Vzniklá barevná reakce je hodnocena vizuálně (podle barevné šablony) nebo spektrofotometricky.

ELISA