Real-time PCR

Další významnou modifikací je real-time PCR (qPCR) – metoda umožňující přímou detekci a kvantifikaci PCR produktu „v reálném čase“ (v průběhu celé PCR reakce), nikoliv až po jeho skončení.

Při stanovení PCR produktů se využívá sledování fluorescenčního signálu, jeho intenzita je permanentně snímána a analyzována speciálním přístrojem, ve kterém současně probíhá vlastní PCR.

K detekci lze využít:

  • fluorescenční barviva fluoreskující po vazbě na dsDNA (např. SYBR® Green I),
  • fluorescenčně značené hybridizační sondy, které se komplementárně vážou na vnitřní část amplifikované sekvence,
  • fluorescenčně značené primery.

Díky tomu, že se vzniklé PCR produkty nemusí detekovat elektroforeticky, je tato metoda jednodušší a rychlejší než klasická PCR.

Velkou výhodou metody real-time PCR je možnost kvantifikace množství templátu. Stanovení množství molekul nukleových kyselin ve vzorku se využívá při studiu detekce patogenních mikroorganismů a virů a také exprese genů (zejména studium transkripce – zda je a v jaké míře daný gen přepisován z DNA do mRNA).