Průkaz β-galaktosidasy (ONPG-test)

Test je zaměřen na průkaz enzymu β-galaktosidasy, který mikroorganismy potřebují při fermentaci laktosy. Jeho tvorba je detekována pomocí syntetického substrátu o-nitrofenyl-β-D-galaktopyranosidu (ONPG).

V pozitivním případě dochází účinkem enzymu k uvolnění žlutě zbarveného nitrofenolu, při negativní reakci zůstane roztok bezbarvý.

Reakce je významná pro rozlišení rodů v čeledi Enterobacteriaceae; je pozitivní i u rodů, které laktosu zkvašují opožděně (např. Citrobacter spp.). Lze tedy rozlišit salmonely (negativní) od citrobakterů či E. coli (pozitivní).

Postup: 

  • Čistou kulturu testovaného kmene homogenizujeme v 0,6 ml sterilního fyziologického roztoku ve zkumavce tak, aby vzniklý zákal odpovídal 2. stupni McFarlandovy zákalové stupnice.
  • Do připravené suspenze vložíme diagnostický proužek (papírová zóna proužku musí být zcela ponořena).
  • Zkumavku inkubujeme v termostatu při teplotě 37 °C po dobu 24 hodin (enterobakterie), pro gramnegativní nefermentující bakterie se doporučuje teplota 30 °C po dobu 48 hodin.
  • K testování použijeme 24-hodinovou kulturu.

Vyhodnocení: Po uplynutí inkubační doby hodnotíme výsledné zbarvení ve zkumavce.