Kultivace mikroorganismů

Lyofilizace

K dlouhodobému uchovávání lze použít také metodu lyofilizace. Suspenze buněk nebo spor v ochranné kapalině bohaté na bílkoviny (bujón, krevní sérum, syrovátka, atd.) se přenese do sterilních ampulek, zmrazí se v lyofilizačním přístroji na -30 až -80 °C a vysuší za vysokého vakua. Pro zachování vakua se ampulky zataví. Během lyofilizace sice dochází k odumření části bakteriálních buněk, avšak přežívající buňky jsou životaschopné po řadu let. Před použitím je nutno lyofilizované kultury oživit pasážováním v tekuté živné půdě za optimálních podmínek.

Uchovávání v zmrazeném stavu

Nejvhodnějším způsobem dlouhodobého uchovávání mikroorganismů je uchovávání v uzavřených mikrozkumavkách v zmrazeném stavu v hlubokomrazících boxech nebo v prostředí tekutého dusíku (-80 °C, respektive -150 až -200 °C). K zamražování lze použít buď komerčně vyráběné úchovné kryobanky s porézními kuličkami a živným médiem (např. ITEST kryobanka) nebo lze přímo v laboratoři připravit uchovávací půdu s glycerolem (20 – 50%) a tu rozplnit do mikrozkumavek se šroubovacím víčkem a sterilizovat.

Sterilní kličkou se nabere 18 – 24hodinová kultura bakterií a opatrně se resuspenduje (o stěnu) v živném médiu v mikrozkumavce. Hustota suspenze by měla odpovídat 3. – 4. stupni McFarlandovy zákalové stupnice. V závislosti od použitého způsobu zamražení a teploty úchovy mohou bakteriální kultury přežívat až několik let. Vyočkování se opět provádí sterilní kličkou, kulička či malé množství glycerinového média se přenese do vhodného tekutého média nebo na pevnou půdu a kultivuje se běžným způsobem.

Obrázek: Způsoby uchovávání mikroorganismů (a – uchovávací půda s glycerolem; b – kryobanka s porézními kuličkami; c – šikmý agar v plastové zkumavce)