Kultivace mikroorganismů

Od předešlé metody se liší použitím dvou různých tekutých pomnožovacích půd.

V prvním stupni se kultivace vzorku provádí v neselektivní půdě (tzv. předpomnožení, např. pufrovaná peptonová voda) nebo v půdě se sníženým obsahem inhibitorů (primární pomnožení, např. poloviční bujón podle Frasera). Tento stupeň se zařazuje z důvodů oživení – resuscitace – mikroorganismů, které mohou být částečně poškozeny vlivem technologických procesů při výrobě potravin.

Následuje druhý stupeň, který představuje sekundární (selektivní) pomnožení v tekuté selektivní půdě, kam sterilní pipetou přenášíme předepsané množství předpomnoženého vzorku.

Vyočkování na selektivně diagnostické půdy se provádí ze druhého, případně prvního i druhého stupně. Při výskytu suspektních kolonií stanovovaného mikroorganismu následuje jejich konfirmace.

V případě průkazu salmonel se vzorek pomnožuje nejprve v neselektivním bujonu (pufrovaná peptonová voda), poté v bujonech selektivních (Rappaport Vassiliadis sója médium a Mueller-Kauffman tetrationát novobiocin médium). Při průkazu Listeria monocytogenes se v primárním pomnožení používá poloviční bujon podle Frasera, v sekundárním pak bujon podle Frasera s plným obsahem všech jeho složek. Dále se dvoustupňová kultivace používá např. při průkazu Cronobacter sakazakii a dalších.