Polymerázová řetězová reakce (PCR)

Všechny komponenty pro přípravu PCR směsi (master mixu) je vždy třeba před použitím jemně promíchat a krátce odstředit při nízkých otáčkách na pikofuze.

Jako první pipetujeme vodu, reakční pufr a ostatní komponenty – primery, dNTP, MgCl₂, Taq polymerasu do ní postupně přidáváme. Jako poslední se přidá templátová DNA.

Pro rutinní provádění PCR jsou k dispozici komerčně předpřipravené reakční směsi.

Při vyšetřovaní většího množství vzorků si můžeme PCR reakční směs připravit najednou smícháním všech komponent (kromě templátové DNA) v mikrozkumavce typu Eppendorf. Obsah promícháme a krátce odstředíme a rozplníme do předem označených PCR mikrozkumavek po požadovaném množství pro jednu reakci. Po rozplnění přidáme potřebné množství templátové DNA daného vzorku (obvykle 1 – 2 μl). Obsah opět promícháme a krátce odstředíme.

Takto připravené mikrozkumavky vkládáme do termocykleru.