Základní testované biochemické vlastnosti

Agar podle Hajny obsahuje tři základní cukry – glukosu, laktosu, sacharosu, a železité soli.

Enzymatickou činností mikroorganismů dochází ke změně původně červené barvy média na žlutou, a to v různém rozsahu dle spektra využívaných cukrů. Současně lze sledovat produkci plynu a tvorbu sirovodíku.

Příprava agaru: TSI agar se připravuje jako šikmý agar s vyšším klínem. Jednotlivé cukry jsou na základě své molekulové hmotnosti rozděleny následovně: dole sacharosa, uprostřed glukosa a v horním klínu laktosa. Toto rozdělení umožňuje dobře rozpoznat zkvašování jednotlivých cukrů. Indikátorem štěpení je fenolová červeň.

Postup:

• Očkování testované bakteriální kultury se provádí vpichem do agarového sloupce a následně hadovitým rozočkováním po povrchu klínu.
• K testování použijeme 24-hodinovou kulturu.
• Naočkované zkumavky inkubujeme při 37 °C po dobu 24 – 48 hodin.

Vyhodnocení: Po ukončení inkubace hodnotíme změnu barvy kultivační půdy, tvorbu plynu (potrhání agaru) a tvorbu sirovodíku (černání kolem vpichu způsobené reakcí sirovodíku s ionty železa za tvorby černého sulfidu železitého). Zkvašuje-li mikroorganismus (např. salmonely a shigely) pouze glukosu, zežloutne jen sloupec a šikmá plocha zůstane červená (horní šikmá část půdy se oxidativní dekarboxylací aminokyselin z peptonu alkalizuje, proto červená). Pokud testovaný mikroorganismus (např. E. coli, enterobakter) zkvašuje současně s glukosou i laktosu či sacharosu, příp. všechny tři cukry, zežloutne sloupec i šikmá plocha (vytvoří se tak velké množství kyseliny, že alkalizace šikmé části neproběhne).