Stanovení celkového počtu mikroorganismů

V mikrobiologii potravin pod pojmem celkový počet mikroorganismů (CPM) rozumíme stanovení počtu mezofilních aerobních a fakultativně anaerobních mikroorganismů (bakterie, kvasinky a plísně), které rostou v neselektivních nutričně bohatých médiích nebo tvoří kolonie na nutričně bohatých agarových půdách za aerobních podmínek během inkubace při 30 °C po dobu 72 hodin.

Stanovení CPM má význam jako základní informace o stupni mikrobiální kontaminace a rekontaminace surovin, hotových výrobků a prostředí provozoven. Z jeho výsledků lze usuzovat na dodržení technologických postupů a hygienických směrnic při výrobě, přepravě a uskladnění výrobků i surovin. Nemá však význam pro kontrolu potravin, při jejichž výrobě byly použity kulturní mikroorganismy.

V mikrobiologické praxi se ke stanovení CPM používají dvě metody, a to plotnová metoda a stanovení v tekuté půdě – metoda MPN. Mimo to se např. v mlékařství rutinně používají i moderní přístrojové metody stanovení (např. BactoScan).

Plotnová metoda

Princip

Určený objem tekutého vzorku, výchozí suspenze u ostatních vzorků a jejich desetinásobných ředění se zalévá agarovou živnou půdou v Petriho miskách. Jako arbitrážní půda je určen agar s glukózou, tryptonem a kvasničným extraktem (GTK agar). Inokulované plotny se inkubují aerobně při 30 °C po dobu 72 hodin. Stanoví se celkový počet mikroorganismů v 1 ml nebo 1 g vzorku z počtu kolonií vyrostlých na vybraných plotnách.

Postup

Odebereme zkušební vzorek a připravíme výchozí ředění a tolik dalších desetinásobných ředění, aby bylo možno stanovit předpokládaný počet mikroorganismů.

Jednotlivá ředění očkujeme vždy jinou sterilní pipetou po 1 ml souběžně do dvou řádně označených sterilních Petriho misek.

Inokulum v každé Petriho misce přelijeme asi 15 ml GTK agaru o teplotě 45 ± 2 °C, důkladně krouživým pohybem promícháme a necháme utuhnout na chladné vodorovné ploše. Předpokládáme-li přítomnost mikroorganismů vytvářejících povlaky, přelijeme po utuhnutí agar na misce asi 5 ml téže půdy (již nemícháme, pouze převrstvíme!).

Po ztuhnutí agarové půdy Petriho misky obrátíme dnem vzhůru a inkubujeme aerobně v termostatu při teplotě 30 °C po dobu 72 hodin.

Hodnocení výsledků

Po ukončení inkubace spočítáme kolonie narostlé na každé misce, a to bez ohledu na jejich velikost, barvu či tvar. Pro výpočet použijeme misky obsahující 10 – 300 kolonií ve dvou po sobě jdoucích ředěních. Celkový počet mikroorganismů vyjádříme jako počet KTJ v 1 ml nebo 1 g vzorku.